epravo.cz

Zásobní roztok č. 1: 117,6  g  CaCl
2
.2H
2
O   se  rozpustí  ve  vodě
                     a roztok se doplní vodou na objem 1 litru.
Zásobní roztok č. 2: 49,3  g   MgSO
4
.7H
2
O  se  rozpustí   ve  vodě
                     a roztok se doplní vodou na objem 1 litru.
Zásobní roztok č. 3: 25,9 g NaHCO
3
 se rozpustí ve vodě a roztok se
                     doplní vodou na objem 1 litru.
Zásobní roztok č. 4: 2,3  g KCl  se rozpustí  ve vodě  a roztok se
                     doplní vodou na objem 1 litru.
                     

MgCl
2
.6H
2
O            1,2 g
NH4Cl                 1,5 g
CaCl
2
.2H
2
O            1,8 g
MgSO
4
.7H
2
O            1,5 g
KH
2
PO
4
                0,16 g
Zásobní roztok  č.  2  -  Fe-EDTA  (navážky  na  1  litr zásobního
roztoku):
FeCl
3
.6H
2
O            64 mg
Na
2
EDTA.2H
2
O*)        100 mg
*) sodná sůl kyseliny ethylendiamintetraoctové
Zásobní roztok č.  3 - stopové prvky (navážky  na 1 litr zásobního
roztoku):
H3BO
3
 *)              185 mg
MnCl
2
.4H
2
O            415 mg
ZnCl
2
                 3 mg
Cst. Cl
2
.6H
2
O            1,5 mg
CuCl
2
.2H
2
O            0,01 mg
Na
2
MoO
4
.2H
2
O          7 mg
*) H3BO3 může být rozpuštěna přidáním 0,1 mol/l NaOH
Zásobní  roztok  č.  4  -  NaHCO
3
  (navážky  na  1  litr zásobního
roztoku):
NaHCO
3
                50 g

Obrázek  č. 1  - postupový  diagram testů  k hodnocení  nebezpečné
vlastnosti H14 Ekotoxicita

Tabulka č. 1 Požadavky a výsledky ekotoxikologických testů

+------------------------------+----------+--------------------------------------+-------------------------------------------+
|                              | Doba     |                                      |                                           |
| Testovaný organismus         | působení | I                                    | II                                        |
|                              | (hod.)   |                                      |                                           |
+------------------------------+----------+--------------------------------------+-------------------------------------------+
|                              |          | ryby nesmí vykazovat v ověřovacím    | ryby nesmí vykazovat v ověřovacím         |
| Poecilia reticulata nebo     |          | testu výrazné změny chování  ve      | testu výrazné změny chování ve            |
| Brachydanio rerio            |    96    | srovnání s kontrolními vzorky a      | srovnání s kontrolními vzorky a           |
|                              |          | nesmí uhynout ani jedna ryba         | nesmí uhynout ani jedna ryba              |
+------------------------------+----------+--------------------------------------+-------------------------------------------+
|                              |          | procento imobilizace perlooček nesmí | procento imobilizace perlooček nesmí      |
| Daphnia magna Straus         |            48    | v ověřovacím testu přesáhnout 30 %   | v ověřovacím testu přesáhnout 30 %        |
|                              |          | ve srovnání s kontrolními vzorky     | ve srovnání s kontrolními vzorky          |
+------------------------------+----------+--------------------------------------+-------------------------------------------+
| Raphidocelis subcapitata     |          | neprokáže se v ověřovacím testu      | neprokáže se v ověřovacím testu           |
| (selenastrum cepricornatum)  |    72    | inhibice růstu řasy větší než 30 %   | inhibice nebo stimulace růstu řasy větší  |
| nebo Scenedesmus subspicatus |          | ve srovnání s kontrolními vzorky     | než 30 % ve srovnání s kontrolními vzorky |
+------------------------------+----------+--------------------------------------+-------------------------------------------+
|                              |          | neprokáže se v ověřovacím testu      | neprokáže se v ověřovacím testu           |
| semena Sinapis alba          |    72    | inhibice růstu kořene semene větší   | inhibice nebo stimulace růstu kořene      |
|                              |          | než 30 % ve srovnání s kontrolními   | semene větší než 30 % ve srovnání         |
|                              |          | vzorky                               | s kontrolními vzorky                      |
+------------------------------+----------+--------------------------------------+-------------------------------------------+
   Pokud výsledky testů nesplňují  dané požadavky ve všech čtyřech
parametrech  hodnocení, nelze odpad využít na povrchu terénu.

Postup  vychází z  práce Ekotoxikologické  hodnocení výluhů tuhých
průmyslových odpadů [20].
1. Předmět testu
Stanovení toxického  účinku látek obsažených  ve vodném výluhu  na
klíčivost  semen  a  růst  kořene  v  počátečních  stadiích vývoje
rostliny.
2. Seznam použitých zkratek a značek
Vysvětlení použitých  značek a zkratek  je uvedeno v  kapitole 2.3
tohoto metodického pokynu.
3. Termíny a definice
Vysvětlení použitých  termínů a definic je  uvedeno v kapitole 2.4
tohoto metodického pokynu.
4. Testovací organismus a potřebné chemikálie
4.1 Testovací organismus
Testovacím organismem  jsou semena hořčice  bílé (Sinapis alba)  s
klíčivostí  minimálně 90  %, střední  velikosti (1,5  až 2,5  mm),
okrově žlutá.
4.2 Voda
K přípravě  ředící vody,  zásobních  roztoků  a vodného  výluhu se
používá voda v souladu s požadavky uvedenými v kapitole 2.4 tohoto
metodického pokynu.
4.3 Chemikálie
CaCl2 (p.a.)
MgSO4.7H2O (p.a.)
NaHCO3 (p.a.)
KCl (p.a.)
4.4 Ředící voda
Směs zásobních  roztoků a vody  svým složením odpovídá  požadavkům
ČSN EN ISO 7346-2 [16] a ČSN EN ISO 6341 [14]. Postup pro přípravu
zásobních roztoků  je uveden v  kapitole 3.3.1 tohoto  metodického
pokynu.
4.5 Pomůcky a zařízení
Petriho  misky o  průměru 120   až 140  mm, filtrační  papír větší
pórovitosti, pinzeta, pipety,  odměrné baňky, milimetrové měřítko,
nůžky, termostat pro teplotu 20 st. C.
5. Podmínky testu
Teplota: 20 +/- 2 st. C
Množství  vodného výluhu  (testovaného roztoku):  10 ml  na každou
Petriho misku
Počet testovacích jedinců: 30 semen na každé Petriho misce
Délka expozice: 72 hodin
Ostatní podmínky: bez osvětlení
6.Pracovní postup
6.1 Úvodní test
   Test se provádí s neředěným vodným výluhem (testovacím roztokem
připraveným  z  vodného  výluhu  odpadu  obohacením  solemi  - viz
kapitola 3.3.1 tohoto metodického pokynu). Z filtračního papíru se
vystřihnou kruhy  podle velikosti dna použitých  Petriho misek. Ty
se vloží  na dna Petriho  misek a nasytí  se 10 ml  vodného výluhu
nebo  ředící vody  (kontrola).  Na  navlhčené filtrační  papíry se
pinzetou  rovnoměrně  rozmístí  po  30  semenech. Takto připravené
Petriho  misky  se  umístí  do  termostatu  s  teplotou  20 st. C bez
přístupu světla. Po  72 hodinách se změří a  zaznamená délka všech
kořenů semen testovaných ve výluhu i nasazených v kontrole.
6.2 Předběžný test
Test  se  provádí  v  širokém  rozsahu  koncentrací vodného výluhu
(např. 1, 10, 100, 500 ml.l
-1
  a neředěný výluh). K ředění vodného
výluhu  se   použije  ředící  voda.   Do  misek  se   za  podmínek
odpovídajících úvodnímu testu nasazuje 30 semen.
6.3 Základní test
Na   základě  výsledku   předběžného  testu   se  připraví  vhodná
koncentrační  řada vodného  výluhu  (5  či více  koncentrací). Pro
testování každé  koncentrace a pro příslušnou  kontrolu se použije
60 semen (ve dvou Petriho  miskách). Pracovní postup je analogický
s postupem pro úvodní test.
6.4 Ověřovací test
Tento  test  se  provádí  s  neředěným  vodným výluhem za podmínek
stejných jako u úvodního testu. Do vodného výluhu a do kontroly se
nasazuje 90 semen (ve třech Petriho miskách).
6.5 Vyhodnocení testů
Základním  sledovaným parametrem  pro hodnocení  testu je průměrná
délka  kořene.  Hodnota  stanovená  v  neředěném  vodném výluhu či
testovaných koncentracích vodného výluhu  se porovná s kontrolou a
vypočítává   se   procento   inhibice   (zkrácení)   či  stimulace
(prodloužení kořene).  V protokolu o  testu se uvádí  rovněž počet
nevyklíčených  semen.  Do  aritmetického  průměru  se  tato semena
započítávají jako semena s  nulovou délkou kořene. Jestliže semeno
vyklíčí,  ale nevytvoří  kořínek,  započítává  se tato  hodnota do
aritmetického průměru rovněž jako nulová.  V testech s více než 30
semeny na testovanou koncentraci vodného výluhu a kontrolu, kdy se
nasazují  semena  do  více  Petriho  misek,  nemá  být variabilita
výsledků v jednotlivých miskách u příslušného roztoku větší než 30
%.
Stanovení hodnoty  IC 50 se  provede pomocí probitové  metody nebo
vhodným vyhodnocovacím programem za použití výpočetní techniky.
6.6 Test klíčivosti a růstu kořene na standardu
Doporučuje se průběžně ověřovat  správnost postupu a kvality semen
pomocí testu provedeného na  standardu K2Cr2O7. Testy se standardy
se provádějí  za stejných podmínek a  vyhodnocují stejným způsobem
jako základní  testy (hodnoty koncentrací  standardu se uvádějí  v
mg.l
-1
). Podle dosavadních zkušeností se  hodnoty IC 50 pohybují v
rozmezích stanovených v níže uvedené tabulce č. 2.

Tabulka č. 2 Rozmezí 72 IC 50 (při expozici 72 hod.)

+------------------------------+-------------------------------+
|  Testovací organismus        |   Rozmezí hodnot              |
|                              |   72 IC 50 (mg.l
-1
)           |
+------------------------------+-------------------------------+
|  Sinopis alba                |   10 - 50                     |
+------------------------------+-------------------------------+

7. Platnost testu
Výsledky  testů  se  považují  za  platné,  jestliže  jsou splněny
následující požadavky:
a) klíčivost semen v kontrole je nejméně 90 %
b) stanovená  hodnota  72  IC  50  standardu dichromanu draselného
   (K2Cr2O7) pro testovaná semena je v rozmezí uvedeném v kapitole
   6.6 této přílohy.